Комплекти за оцветяване по Грам

Оцветяването по Грам е диференциален метод на оцветяване, широко използван в микробиологията, който може да се използва за разграничаване на Грам-положителни бактерии (G+) от Грам-отрицателни бактерии (G-). Основният принцип се основава на различните химични компоненти на бактериалните клетъчни стени. След първично оцветяване с кристално виолетово и протравка с йод, бактериите образуват водонеразтворими комплекси кристално виолетово-йод в клетъчната стена. Грам-положителните бактерии имат дебели клетъчни стени, не съдържат липиди, богати са на пептидогликан и са омрежени, за да образуват плътна решетъчна структура. Когато се третира с етанол, пептидогликановата мрежа се свива, което може да блокира комплекса кристален виолетов-йод. Той остава в клетъчната стена, придавайки й лилав цвят на кристално виолетово. Грам-отрицателните бактерии, от друга страна, имат тънки клетъчни стени, ниско съдържание на пептидогликан и хлабаво кръстосано свързване. Когато е изложена на етанол, богатата на липиди външна мембрана се разтваря, появява се голяма празнина в клетъчната стена и кристалният виолетово-йоден комплекс изтича, така че клетките стават безцветни след обезцветяване с етанол. В този момент чрез контраоцветяване със сафранин грам-отрицателните бактерии ще бъдат оцветени в червено.

Разтворът за оцветяване по Грам съдържа четири компонента, а именно разтвор за оцветяване с кристално виолетово амониев оксалат, 1% разтвор на йод, разтвор за обезцветяване и разтвор за оцветяване с фуксин. След оцветяване грам-положителните бактерии изглеждат лилави до синьо-лилави, а грам-отрицателните бактерии изглеждат червени.

Съхранение и транспортиране при стайна температура; валиден 12 месеца.

1. Депарафинизирайте парафиновия участък до вода; изсушете бактериалната натривка естествено или я затоплете със спиртна лампа, за да изсъхне и да я фиксирате.

2. Първоначално боядисване: Добавете разтвор за оцветяване с кристално виолетово на капки, за да покриете пробата за 10-30 s, измийте с вода и изсушете.

3. Боядисване с морилка: Добавете 1% разтвор на йод на капки, за да покриете пробата за 1-1.5 минути, измийте с вода и изсушете.

4. Обезцветяване: на капки добавете обезцветяващ разтвор, за да изплакнете тъканта от единия край на предметното стъкло за обезцветяване, докато обезцветяващият разтвор, който се стича надолу, вече не изглежда лилав и незабавно измийте с вода, за да отстраните обезцветяващия разтвор. Внимавайте да контролирате времето за обезцветяване.

5. Контраоцветяване: добавете разтвор за оцветяване с фуксин на капки за 20-60 s, след което измийте с вода. Попийте краищата с филтърна хартия.

6. Бактериалните петна могат да се наблюдават директно чрез микроскопия. След изсушаване при 60 градуса, тъканните срезове бяха бързо дехидратирани в абсолютен етанол за три пъти, съответно 1 s, 3 s и 5 s. След това се транспарира с ксилен в продължение на 5 минути и накрая се запечатва с неутрална гума за микроскопско изследване.

1. Затегнете капачката навреме след използване на реагента, за да предотвратите изпаряването на разтворителя.

2. Бактериалната натривка е твърде дебела, времето за оцветяване с кристално виолетово е твърде дълго и обезцветяването е недостатъчно, което може да доведе до фалшиво положителни резултати. Препоръчва се да се правят както отрицателни, така и положителни бактериални контролни групи.

3. Всеки комплект оцветяващ разтвор може да се използва за оцветяване на приблизително 30 секции (капково оцветяване).

4. Моля, носете лабораторна престилка и ръкавици за еднократна употреба по време на работа.

Само за изследователска употреба!

Популярни тагове: комплекти за оцветяване по грам, Китай комплекти за оцветяване по грам производители, доставчици, фабрика