▇ ЕксперименталенПроцедура
1. Потопете секцията за смилане в Масон Разтвор за една нощ (приблизително 15 часа).
2. Поставете секцията в Масон разтвор и отопление във фурна от 37 градуса за 30 минути. Едновременно с това, предварително загрейте разтворите на Masson D и Masson F в същата фурна.
3. Изплакнете с чешмяна вода в продължение на 30 s, докато жълтият нюанс в тъканта вече не е изявен.
4. Точно преди употреба смесете Masson B и Masson C решения в равни обеми. Оцветете секцията в сместа за 3 минути, след което за кратко изплакнете с течаща вода.
5. Диференцирайте се в 1% хидрохлорен алкохол за около 1 минута, докато ядрото изглежда сиво-черно и фонът е почти безцветно или светло сиво.
6. Накратко изплакнете с чешмяна вода, отстранете излишната вода и оцветяване с разтвор на Masson D за 6 минути, докато тъканта изглежда яркочервена. Ако червеният цвят е твърде лек, удължете съответно времето за оцветяване.
7. Отстранете излишната вода, без да позволите на секцията да изсъхне напълно, след което да се обработите с разтвор на Masson E за приблизително 2 минути.
8. Без изплакване леко изцедете излишния разтвор на Masson E и потопете директно в разтвор на Masson F в продължение на 5 минути.
9. Диференцирайте се чрез измиване в три цилиндъра с 1% ледена оцетна киселина за около 5 s на цилиндър. Дехидратирайте в три цилиндъра на абсолютен етанол: 5 s в първия, 10 секунди във втория и третия. Изчистете в два цилиндъра N-бутанол (30 s в първия, 2 минути във втория), последвано от два цилиндъра ксилол (10 s всеки). И накрая, монтирайте с неутрална смола
▇ Тълкуване на резултатите
Колагенните влакна изглеждат сини. Мускулните влакна, фибрин и червени кръвни клетки изглеждат червени.
▇ Предпазни мерки
- След като оцветявате с Masson A Solution, изплакнете достатъчно просто просто, за да почистите секцията.
- Сменете смесения разтвор за оцветяване въз основа на броя на секциите или пригответе свеж разтвор, ако е необходимо.
- Внимателно контролирайте интензивността на оцветяването на сътрудника на разтвор на Masson D не трябва да изглежда червен или твърде интензивен, тъй като това може да повлияе на последващото оцветяване с разтвор на Masson F.
- По време на диференциация с ледникова оцетна киселина прекомерната диференциация води до бледо синьо колаген, докато недостатъчната диференциация може да причини припокриване с червено, произвеждайки лилаво-син цвят.
▇ Съвети
Какви проби изискват секции за смилане на твърда тъкан?
Проби, съдържащи метал, керамика, пластмаси, влакна, остеогенни материали или съдови тъкани с метални стентове, както и недекалцифицирани кости и зъби, изискват секции за смилане на твърда тъкан. Тези материали не могат да бъдат премахнати и декалцифицирани след имплантация поради необходимостта от интегративен анализ. Освен това, отстраняването може да причини фрагментация на тъканите. Следователно вграждането на имплантата в секцията и извършването на оцветяване е от съществено значение за точната хистологична оценка.
