Комплект за откриване на остатъци от РНКаза

 

Име на продукта	кат.№	спец.
Комплект за откриване на остатъци от РНКаза	G3058-100T	100 T

 

 

Рибонуклеазата (RNase) е вид РНК хидролаза, която обикновено съществува в околната среда и има висока концентрация на остатъци в някои биоматериали, ензими и реагенти, което има много неблагоприятен ефект върху свързаното експериментално действие на РНК. Следователно е необходимо да се открие остатъкът от РНК във всеки разтвор или биоматериал, който влиза в контакт с РНКаза.

Комплектът съдържа уникален РНК модифициран субстрат (RNase Substrate), който може бързо и чувствително да открие активността на RNase. РНК модифицираният субстрат има флуоресцентна група в единия край и гасителна група в другия край. Когато няма РНКаза, охлаждащата група е близо до флуоресцентната група, което потиска флуоресценцията на флуоресцентната група до много ниско ниво. В присъствието на РНКаза, РНК модифицираният субстрат се хидролизира, флуоресцентната група и гасената група се разделят в пространството и флуоресцентната група произвежда голям брой флуоресцентни сигнали. Тъй като флуоресценцията на РНК субстрата се увеличава с увеличаване на активността на РНКаза, резултатите, наблюдавани с ензимно-белязан инструмент, могат да бъдат кинетично оценени.

Комплектът осигурява RNase A като положителна контрола на системата за откриване и може да открие RNase A до 0.5 pg. В допълнение към откриването на активността на RNase A, той може също така да открива активността на RNase T1, Micrococcal Nuclease, S1 Nuclease, Mung Bean Nuclease и Benzonase и др. В допълнение, комплектът е съвместим със системата за откриване на DNase. Тъй като РНК субстратът и ДНК субстратът имат два различни флуоресцентни етикета, два вида субстрати могат да бъдат добавени към една и съща реакционна система и анализът в реално време на РНКаза и ДНКаза в една проба може да се извърши от инструмент, маркиран с ензим.

 

 

Доставя се с мокър лед и се съхранява при -20 градуса. валиден до 1 година.

 

 

Номер на компонента	Компонент	G3608-50T
G3058-1	10×реакционен буфер	2×1 мл
G3058-2	РНКаза А (1 U/μL)	10 μL
G3058-3	РНКазен субстрат	200 μL
G3058-4	ZnSO4 (100 mM)	200 μL
G3058-5	Вода без нуклеази	20 мл
Ръководство		Един екземпляр

 

 

1. 96-ямкова черна ензимна плака (без нуклеаза).

2. Пипети и накрайници без нуклеаза.

 

 

1. Преди да подготвите реакционната система:

а. Разреждане на поредица от концентрационни градиенти на РНКаза А за получаване на стандартни криви: РНКаза А (10 mg/mL) се разрежда до 0.25 pg/μL, 0.5 pg/μL , 1 pg/μL и 2 pg/μL с вода без нуклеаза. Без добавяне на РНКаза А като отрицателна контрола, 10 μL бяха добавени към 96-ямковата ензимна плака и крайното количество РНКаза А беше 0, 2,5 pg, 5 pg, 10 pg и 20 pg.

b. Подготовка на пробата: Ако пробата за тестване е течна, тя може да се използва директно; ако пробата за тестване е твърда, след вземане на пробата, тя трябва да се накисне във вода без нуклеаза, за да се подготви течна проба за готовност.

2. Подгответе реакционната система с позоваване на следната таблица:

Когато подготвяте реакционната система, моля, добавете съответните компоненти на комплекта към 96-платката с гнезда съгласно таблицата по-долу:

Компонент	Минус-RNase контрол	Plus-RNase контрол	Експериментални проби
10×реакционен буфер	10 μL	10 μL	10 μL
РНКаза А	0	10 μL	0
проба	0	0	10 μL
РНКазен субстрат	2 μL	2 μL	2 μL
Вода без нуклеази	До 100 μL	До 100 μL	До 100 μL

Забележка: RNase субстратът трябва да се добави към реакционната система в края, за да се избегне разграждането му предварително. Ако откритата нуклеаза е зависима от Zn2+-, като нуклеаза на Mung Bean, нуклеаза S1 и др., добавете 1 μL 100 mM ZnSO4 към реакционната система.

3. Откриване: Реакционната система се смесва чрез разклащане или леко продухване, за да се осигури адекватно смесване и след това незабавно се открива с помощта на ензимен маркер. Задайте температурата на откриване на маркирания с ензим инструмент на 37 градуса (ако няма настройка на температурата, ензимната активност може да е ниска при стайна температура), дължината на вълната на възбуждане/излъчване е 492/518, 30 минути се откриват непрекъснато и интервалът от време е 2 минути (времето за откриване може да се регулира според съдържанието на RNase, а когато съдържанието е ниско, времето за откриване може да се удължи до 60 min, а интервалът е 5 min).

4. Количеството остатъчна РНКаза А може да се изчисли от стандартната крива.

 

 

1. Моля, прочетете внимателно ръководството на продукта преди употреба.

2. Тъй като рибонуклеазата съществува широко в околната среда, уверете се, че работите с нея в чиста пейка или биобезопасен шкаф, за да избегнете замърсяване на пробите.

3. Подготовката на реакционната система трябва да се извършва върху лед, за да се предотврати предварителното разграждане на РНКазния субстрат.

4. За да гарантирате точността на откриването, моля, подгответе поне два дублиращи се отвора.

5. Ако не се изисква точно откриване на остатъци от РНКаза А, няма нужда да се прави стандартна крива.

6. Приготвянето на реакционния разтвор трябва да се извърши върху лед.

7. РНКаза Субстратът трябва да се пази от светлина и трябва да се избягва силна светлина, когато се приготвя реакционен разтвор.

8. Трябва да се използват накрайници за пипети без нуклеази за приготвяне и подопаковане на реакционния разтвор, за да се избегне кръстосано замърсяване между пробите, доколкото е възможно.

 

Само за изследователска употреба!

 

 

Популярни тагове: комплект за откриване на остатъци от rnase, Китай комплект за откриване на остатъци от rnase производители, доставчици, фабрика