ER-Tracker Green

ER-Tracker green (Ендоплазмен ретикулум Зелена флуоресцентна сонда) е комбинация от зелено флуоресцентно багрило BODIPY FL и Glibenclamide. Групата на глибенкламид в своята химическа структура, първоначално лекарство за лечение на диабет тип II, се свързва със сулфонилурейния рецептор на АТФ-чувствителни калиеви канали в ендоплазмения ретикулум и по този начин може да бъде селективно локализиран в ендоплазмения ретикулум и използван като специфичен за ендоплазмения ретикулум флуоресцентна сонда за маркиране на ендоплазмения ретикулум на клетките.ER тракер зелен има добра специфичност, силно селективен за ендоплазмения ретикулум на живите клетки, рядко оцветява митохондриите и има ниска цитотоксичност. Тази сонда може частично да запази характеристиките на оцветяване на живите клетки след оцветяване и фиксиране.

Кораб със сух лед; Съхранявайте на -20 градуса далеч от светлина за 12 месеца.

1. Приготвяне на работен разтвор за анализ:

1.1. Този продукт е 1 mM разтвор за съхранение, който се затопля обратно до стайна температура преди експеримента и се центрофугира за кратко при ниска скорост, за да се гарантира, че реагентите потъват на дъното на епруветката;

1.2. Разрежда се до 0.25-1 μM работен разтвор за откриване на ендоплазмен ретикулум чрез буфер (Hanks, PBS и т.н., препоръчва се Hanks) или основна среда (без серум);

2. Клетъчно оцветяване (следният протокол е за прилепнали клетки; необходимо е центрофугиране за обмен на суспензионни клетки)

2.1. Нормалните или третирани клетки се промиват 1-2 пъти с буфер за 3-5 минути всеки път;

2.2. Добавете предварително загрят работен разтвор за анализ на ендоплазмен ретикулум и инкубирайте в инкубатор за клетъчна култура при 37 градуса за 20 минути (времето на инкубация може да се регулира до известна степен поради различните типове и състояния на клетки);

2.3. Отстранете работния разтвор на анализа на ендоплазмения ретикулум и измийте с буфер 2-3 пъти за 3-5 минути всеки;

2.4. Зелена флуоресценция (Ex=504 nm, Em=511 nm) се наблюдава под флуоресцентен микроскоп след директно блокиране на филма или със среда за закрепване против избледняване (препоръчва се G1401);

3. Фиксиране на клетки (по избор):

Забележка: След оцветяване този продукт може да бъде фиксиран, но флуоресцентният сигнал ще бъде отслабен след фиксиране; не може да бъде перфориран за обработка и перфорацията ще доведе до изчезването на флуоресцентното етикетиране.

3.1. Оцветените и промити третирани клетки се добавят към фиксатора (препоръчва се G1101) и се фиксират за 5 минути при стайна температура;

3.2. Отстранете фиксатора и измийте с буфер 2-3 пъти за 3-5 минути всеки път;

3.3. След промиване клетките могат да бъдат впоследствие блокирани, микроскопски изследвани или допълнително оцветени според експерименталните нужди.

Забележка

1. Поради различните видове и състояния на клетките, работната концентрация на багрилото и времето за инкубация могат да се регулират по подходящ начин.

2. Сондата не може да бъде перфорирана за лечение след оцветяване и клетъчната флуоресценция изчезва почти напълно след перфорацията.

3. Фармакологичните свойства на глибенкламид могат да повлияят определени функции на ендоплазмения ретикулум; променливата експресия на сулфонилурейни рецептори в някои специализирани клетки може също да доведе до неспецифично за ендоплазмения ретикулум оцветяване.

4. Когато оцветявате и измивате живи клетки, работният разтвор за анализ и промиващият буфер трябва да бъдат предварително затоплени до 37 градуса. Оцветяването и промиването се извършват чрез инкубиране в инкубатор, за да не се повлияе морфологията на клетките чрез стимулация с температурна разлика.

5. За да се предотврати потушаването на флуоресценцията, целият процес на оцветяване трябва да се извършва далеч от светлина.

6. Основните смеси на сондата трябва да се съхраняват в отделни контейнери, за да се избегне повторно замразяване и размразяване. За да се избегнат отпадъци, разтворът за оцветяване се приготвя според нуждите, готов за употреба.

7. За вашето здраве и безопасност, моля, носете лабораторна престилка и ръкавици по време на работа.

Само за изследователска употреба!

Популярни тагове: er-tracker зелено, Китай er-tracker зелено производители, доставчици, фабрика